Detección de Listeria monocytogenes en queso blanco criollo, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) / Detection of Listeria monocytogenes in white cheese by Polymerase Chain Reaction (PCR)

La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR, es un método que permite replicar miles de veces, en pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades de ADN. La aplicación de métodos rápidos y sensibles, para detectar Listeria monocytogenes en muestras de queso blanco, permitirá un mejor control microbiológico del proceso de producción. Se aplicó PCR a 30 muestras de queso blanco, de una quesera de Valencia Estado Carabobo. Se detectó especificidad y sensibilidad para PCR mediante el empleo de la cepa control Listeria monocytogenes 446. Extracción de ADN según metodología descrita por Torres y col., Marcador de peso molecular de 100 pares de base. Se emplearon: cuatro cebadores del gen hlyA de listeriolisina O; iniciadores L1/U1 para banda 938 pb y LF/LR para banda 750 pb del gen hlyA. Estadístico EpiInfo V6 para concordancia de observaciones en geles, mediante coeficiente Kappa (K). Resultados: 8 de las 30 muestras de queso analizadas, mostraron crecimiento presuntivo de Listeria spp en Agar PALCAM. De las cuales 2 de las muestras no pertenecian al género Listeria; en las 6 restantes las pruebas de confirmación arrojaron que: 2 eran L. monocytogenes, 3 L.ivanovii y 1 L. seeligeri. Mediante PCR 2 muestras resultaron positivas para L. monocytogenes al amplificar la banda 938 pb para Listeria y banda 750 pb para la especie monocytogenes. Se concluye que PCR demostró ser altamente específico y sensible para L. monocytogenes, teniendo ventaja sobre agar PALCAM al evidenciar la presencia especifica del patógeno en un tiempo relativamente corto.

The Polymerase Chain Reaction, known as PCR, is a method to replicate thousands of times within a few hours and in vitro, small amounts of DNA. The application of rapid and sensitive methods to detect Listeria monocytogenes in cheese samples, allow a better microbiological control of the production process. PCR was applied to 30 samples of of white cheese, from Valencia, Carabobo State. It was detected PCR specificity and sensitivity by using the control strain Listeria monocytogenes 446. DNA extraction according to the methodology described by Torres et al., Molecular weight marker 100 base pairs. Were used: four primers hlyA gene of listeriolysin O; L1/U1 primers for 938 bp band and LF / LR 750 bp band hlyA gene. EpiInfo Statistical V6 to match observations in gels, by Kappa coefficient (K). Results: 8 out of 30 cheese samples analyzed showed presumptive growth of Listeria spp in PALCAM Agar. Two of the samples not belonged to the genus Listeria, in the 6 remaining sample confirmation tests showed that: 2 were L. monocytogenes, 3 L. ivanovii and 1 L. seeligeri. In PCR 2 samples were positive for L. monocytogenes by amplify the 938 bp band for Listeria and 750 bp band for the species monocytogenes. We concluded that PCR was highly specific and sensitive to L. monocytogenes, taking advantage of PALCAM agar to detect the presence of the pathogen specifies a relatively short time.

Frecuencia de listeria monocytogenes en muestras de tomates (lycopersicum esculentum) y cilantro (coriandrum sativum) frescos en tres supermercados de Valencia, Venezuela / Prevalence of listeria monocytogenes in fresh tomatoes (lycopersicum esculentum) and coriander (coriandrum sativum) in three markets of Valencia, Venezuela

Se determinó la frecuencia de L. monocytogenes en tomates y cilantro, de tres diferentes supermercados, ubicados en el Municipio Valencia, Estado Carabobo, durante ocho semanas. Se evaluaron 192 muestras: 96 de tomates y 96 de cilantro. Procesamiento y análisis microbiológico, según Normas Industriales COVENIN 3718:2001. Paquete estadístico SPSS versión 12.0. Se aplicó prueba de Kolmogorov Smirnov, test de U Mann Whitney y Kruskal Wallis y correlación de Spearman. Nivel de significancia (pListeria spp para tomates y cilantro, durante las ocho semanas de recolección en los tres supermercados; ni tampoco entre las distribuciones de NMP en tomates y cilantro de los tres supermercados (Chi²=5,233 p2=1,624 p2=6,547 p2=2,667 pListeria spp en tomate fue 41,66 por ciento (25,0 por ciento L. monocytogenes y 16,7 por ciento L. ivanovii); en cilantro 77,08 por ciento (36,5 por ciento L. monocytogenes, 33,3 por ciento L. ivanovii, 7,3 por ciento L. seeligeri). Se concluye que el elevado porcentaje encontrado de L. monocytogenes en tomates y cilantro, es independiente del supermercado de expendio; se evidencia la necesidad de un control microbiológico a nivel del sistema de riego, recolección y distribución, para asegurar la calidad del producto.

The incidence of L. monocytogenes in tomatoes and coriander obtained from three different markets, during eight weeks were determined. 192 samples were evaluated: 96 of tomatoes, and 96 of coriander. The isolation of L. monocytogenes was performed using COVENIN 3718:2001. The data were analyzed by SPSS version 12.0. Kolmogorov Smirnov, Mann Whitney U, Kruskal Wallis U test; Spearman’s correlation were applied, and pListeria spp to tomatoes and coriander during the eight weeks of recollection in the markets; neither between the distributions of MPN of tomatoes and coriander from the markets (Chi²=5,233 p2=1,624 p2=6,547 p2=2,667 pL. monocytogenes and 16,7 percent L. ivanovii); in coriander 77,08 percent (36,5 percent L. monocytogenes, 33,3 percent L. ivanovii and 7,3 percent L. seelige.). We concluded that the high level of L. monocytogenes in tomatoes and coriander is independent of the markets store; we see the necessity of a microbiological control on the irrigation system, collection and distribution to ensure the quality of the product.